〔张劲松团队2020科研成果〕三萜在灵芝孢子粉的含量是“微量级”,不宜作为相关产品的定量检测指标

中药质量研究国家重点实验室(澳门大学)在2020年10月以英文发表论文指出:灵芝孢子粉的三萜类含量极低,不适宜作为质量指标。无独有偶,上海市农业科学院食用菌研究所研究团队于同年1月以中文发表的研究报告也指向同一结论,与此同时,“孢子粉三萜溶出量” 亦被再次证明 “与破不破壁无相关性”。

文・图/摘要自《菌物学报》第39卷第1期第184~192页      
编辑/吴亭瑶      繁體中文報導/請連結

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问题:三萜类也是孢子粉主成分?

灵芝化学成分中的灵芝三萜具有抗肿瘤、抗HIV-1病毒、护肝、解毒和改善记忆力等多种功效,是衡量灵芝产品品质高低的重要指标之一。

灵芝孢子粉是子实体发育成熟期从灵芝菌褶中弹射出来的生殖细胞。近年来,随着孢子粉收集和破壁技术的发展,灵芝孢子粉的药理作用已经受到消费者的广泛认可,但其中的标志性有效成分尚不明确,且缺乏法定的标准。

 

疑惑:不同方法测得的结果天差地远

孢子粉及相关产品常用灵芝子实体中的活性成分三萜或多糖作为质控指标,运用分光光度计法进行测定。但是孢子粉和孢子油中含有大量的油酸、亚油酸、麦角甾醇等成分,都可以与香草醛高氯酸(编按:分光光度计法采用的显色溶剂)发生颜色反应,使三萜测定结果远远高于真实值。

根据文献报道,运用分光光度法测得破壁孢子粉三萜含量为 2.94%~3.43%,孢子油三萜含量高于20%。但运用高效液相色谱法研究则发现,市售灵芝孢子粉中灵芝酸类成分含量非常低,有些甚至检测不出。

两种主流检测方法测定结果的差异,使得灵芝孢子粉中是否含有三萜和三萜的具体含量备受争议。因此本研究在已有研究的基础上,排除油脂及麦角甾醇等成分的干扰,对灵芝孢子粉的前处理方法和分析条件进行优化,建立适合灵芝孢子粉中三萜分析测定的 HPLC方法,为评价灵芝孢子粉的质量提供科学依据。

 

证实:孢子粉丶孢子油三萜含量仅子实体百分之一或不到

本研究以40%乙醇水溶液为提取溶剂,将提取液浓缩50倍进行HPLC分析,实现了灵芝孢子粉中13种三萜类成分的含量测定(编按:40%乙醇可使孢子粉中三萜类成分充分溶出,又能最大限度地减少油脂溶出而干扰检测结果;必须将提取液浓缩50倍才能对孢子粉里的13种三萜类定量;此13种成分是孢子粉中可被精准定量的三萜类)。

结果发现,孢子粉和孢子油中的13种三萜类成分含量都是 “微量级”:孢子粉三萜总量为14.24~99.70 µg/g(未破壁为14.24~93.12 µg/g,破壁为20.43~99.70 µg/g),仅为子实体的1/100,而孢子油中三萜总量不足50.0 µg /g。(编按:1 µg = 0.000001 g,1g = 1000000 µg,也就是说,三萜类成分在孢子粉和孢子油中的实际占比不是“百分之几”,而是”百万分之几”。)

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〔原料说明〕灵芝孢子粉样品1~3号样品来自浙江,4号及5号样品产自安徽;5个样品均进行破壁处理,分为未破壁及破壁孢子粉样品;灵芝孢子油样品均为实体购买。

 

结论:三萜类非孢子粉主成分,破不破壁皆然

1. 本研究对比分析了5组未破壁及破壁孢子粉中的三萜含量及组成,发现三萜类成分的溶出量与是否破壁没有相关性。

2. 孢子粉三萜总含量极低,因此不建议三萜作为灵芝孢子粉及其相关产品的检测指标。

3. 分光光度法会使孢子粉中三萜的测定结果严重偏高,呈现假阳性,所以分光光度法并不适合灵芝孢子粉及其相关产品中三萜类含量的测定。
 

〔延伸阅读〕中药质量研究国家重点实验室(澳门大学):灵芝孢子粉的三萜类含量太低,不适宜作为质量指标