〔蘇慶華談三萜〕靈芝酸B及C2在各種靈芝中之含量

詳細內容: 分類：臺北醫學大學蘇慶華教授; 建立於 2015-06-14, 週日 17:59; 點擊數：12939

靈芝酸 C₂已證實在動物實驗具有緩解肝臟毒性之作用，如果能夠分析靈芝產品中靈芝酸 C₂的含量，具有指標作用。不同種類靈芝所含的靈芝酸 B 及 C₂具有某種程度分類上的意義，而不含 B 及 C₂之種類則需另外建立基本指標成分，作為未來靈芝品質之標準。

文／蘇慶華

◎ 本文原載於1999年4月《健康靈芝》第4期 16～20頁

近年來研究已逐漸發現靈芝具有多醣體、免疫蛋白及三萜類等多項生理活性物質，而其中又以三萜類最具豐富性，目前鑑定之成分超過百餘種，但其中僅了解少數幾種成分的部分生理活性。

另一方面，古籍資料也顯示靈芝具有「輕身不老」之效，這様的描述好像多少與肝臟功能有關，因此靈芝對肝臟之影響，也是極具開發性之研究。尤其國人在高度競爭之生活壓力下，難免造成肝臟之過度負擔，而對於種類豐富之三萜類更具開發價值。

在先前之試驗及報告中，顯示靈芝含三萜類之酒精萃取物具有緩和動物肝臟毒性之作用^{（1, 2）}，筆者亦證實，由 Ganoderma tsugae 子實體中純化出之靈芝酸 C₂為緩和肝臟毒性之主要成分之一^（3）。由先前之研究也得知，不同種類靈芝具有不同之三萜類含量及圖譜，也就是說，不同的靈芝三萜類之種類及含量均可能不同。每一種靈芝所含之靈芝酸 C₂也可能相異，其緩和肝臟之作用也可能因而改變。

為了解不同種類靈芝所含靈芝酸 B 及 C₂之含量，共收集包含不同產地靈芝子實體 64 種，進行靈芝酸 B 及C₂之分析。分析結果將有助於靈芝原料及製品之品管，亦可推測不同靈芝可能的保護肝臟效用。

靈芝酸 B 及 C₂均屬於三萜類，Kohda^（4）於 1985 年由 G. lucidum 子實體中純化鑑定，筆者實驗室於 1992 年亦自 G. tsugae 中分離得到相同的成分。靈芝酸 B 及C₂之構造（圖一）十分相似，經常伴隨出現，通常靈芝酸 B 較高，因此在分析靈芝酸 C₂時，靈芝酸 B 雖然沒有保護肝臟之功能，但亦可同時分析，亦可作為化學分類之參考。

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材料的取得及方法

材料來源包括野外採集，購自菌種保存中心（CCRC）之菌種栽培，及農業試驗所植病系彭金騰主任所贈之子實體 64 種，可歸納成 G. neo-japonicum、G. formosanum、G. australe、G. calidophilum、G. mastosporum、G. weberianum、G. pfeifferi、G. resinaceum、G. lucidum、G. tropicum、G. subamboinense、G. boniense、G. fornicatum、G. tsugae、G. curtisi、G. lobatum、G.mirabilis、G. oerstedii 等 18 個生物種。

在眾多子實體様品中，除了紫芝亞屬之 G. neo-japonicum、G. formosanum、G. australe，以及子實體顏色較深之 G. webenanum 之外，其外觀不易由子實體之形態來加以區分。因此其三萜類之分析圖譜亦可作為鑑定工具之一。

如以菌類採集地加以區分，則以台北、苗栗、台中、南投、台南，以及台東全島所得之種類為多，另有北美、南美、南亞及西歐所得之種類，其中 G. lucidum 共有 13 個標本，分別來自台灣東部、台灣西部、南亞及美洲，此 4 個不同來源的菌株間均可交配並且產生下一代。

取子實體每種 2.0 g 於酒精萃取後濃縮至乾燥後，再以 1.5 mL 甲醇溶解後，進行高效液相色層分析儀（HPLC）分析。靈芝酸 B 及 C₂標準品為先前由本研究室所純化，並經由 HPLC 檢查測定。

HPLC 條件以 C-18 管柱（Lichrosphere 100, Merck）分析，移動相為 30% Acetonitrile : 1% Acetic acid ＝ 99：1。管柱恆溫控制於 42℃，流速定為 1 mL / min，並以 UV254 nm 偵測，每様品記錄 1 小時。

靈芝酸 B 及 C₂的含量會隨靈芝的種類與生長地區而異

在分析 64 個子實體様本後，其中 39 個標本含有靈芝酸 B 及 C₂，其餘 25 個標本則無法測得此二種靈芝酸。有趣的是，在所有子實體中，如果具有靈芝酸 B ，也就會出現靈芝酸 C₂，顯示此二種靈芝酸可能共有生合成途徑。

無法測得靈芝酸 B 及 C₂之種類包括：G. neo-japonicum（3 個標本），G. formosanum（1 個標本），G. australe（1 個標本），G. calidophilum（1 個標本），G. mastosporum（2 個標本），G. weberianum（7 個標本），G. pfeifferi（1 個標本），G. resinaceum（1 個標本），G. lucidum（6 個標本），G. subamboinense（1 個標本）。含有靈芝酸 B 及 C₂之種類如圖二。

（點選圖片可放大）

由靈芝酸 B 及 C₂之含量，似乎可以看到此二種三萜類與生物種之某些關係，但其中存在一些矛盾。其中最明顯的發生在 G. lucidum，在分析過程中有 6 個屬於 G. lucidum 之種類不含 B 及 C₂，但另外 7 個則含有 0.1～0.2 mg/g 不等之靈芝酸 B 及 C₂。但如追查其採集來源，則發現原產地在北美、印度及台灣東部之 G. lucidum 均無法測得此二種靈芝酸，而產生 B 及 C₂之種類則全部來自台灣西部。

類似的情況也發生 G. resinaceum，產自西歐之兩種具有 B 及 C₂之生產能力，而來自南亞的則無法測得。由於源自台灣東部、台灣西部、南亞及美洲菌種之四個不同來源的菌株間，在實驗室中均可以經由單孢子品系相互交配成為雙核菌絲，並且產生下一代子實體，然而其靈芝酸 B 及 C₂則迥異，顯然由於生物亞種之間經過長時間之隔離後，逐漸演化成不同的三萜類，不過它們仍保持原始的交配型。

至於不同種類交配之下一代子實體，會產生哪一種形態之三萜類，成為十分有趣之研究課題。同為 G. lucidum 這一組材料可作為菌種起源分布及演化之可能證據。至於產生靈芝酸 B 及 C₂之種類是較為進化或較原始，目前尚無法得知，但如果由三萜類圖譜之複雜程度為演化之指標，則可能找得到某些暗示。

由 HPLC 分析三萜類的圖譜差異性
可作為區別不同種靈芝之依據

在此茲舉兩個例子加以說明，其中之一為 G. lucidum（CCRC-36144）這一原產美國様品之 HPLC 圖譜，取其 20 mL 之酒精萃取様品分析，所得到之分析圖只顯示一些靠左一群極性較大的一些 254 nm 吸光物質，其餘則一片空白，顯示在分析範圍內，只有很少的物質通過（圖三）。

而另一個極端的例子則為 G. lobatum（CCRC-42985）原產地為加拿大，則產生極豐物的物質，在同様分析條件下，可供分析之峰有數十個，而且靈芝酸 B 及 C₂之含量很高（圖四）。

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同様產於北美的兩個靈芝種即有極大的 HPLC 圖譜差異性，也就是說，每種靈芝在三萜類含量上的差異不僅存在於靈芝酸 B 及 C₂，也同時存在於其他類型之三萜類或其他物質。這種差異性是否為一種穩定的性狀，作為區別不同種之依據，根據筆者累積之經驗，認為是一種可行而方便的方法。

雖然有許多學者認為，三萜類屬於微生物的二級代謝產物（secondary metabolite），其再現性有待斟酌，不過以靈芝的生活史中，經由菌絲之支持成長到一定階段後，產生子實體，期間菌絲體累積足夠的三萜類前驅物質，才能達到出菇（由無性世代轉到有性世代）產生子實體。

因此如果說三萜類是靈芝菌絲的二級代謝產物，但它又是出菇所需的物質，則可定義為子實體的一級代謝產物（primary metabolite）。因為經由 HPLC 或 TLC 的分析實證，在判斷菌種的種類幾乎沒有例外，尤其以三萜類含量豐富的種類更為清楚。

大致而言，分類上偏向紫芝亞屬的靈芝，包括：G. neo-japonicum、G. formosanum、G. australe，或子實體顏色較深之 G. webenanum，都分析不到靈芝酸 B 及 C₂。而 G. tsugae 一群則穩定而且較高量產生此二種三萜類。一般而言，同一標本中之靈芝酸 B 高於靈芝酸 C₂，但在 G. resinaceum、G.mirabilis 及 G. oerstedii 則有相反之情形，是否具有分類上之意義還有待查證。

在 G. tsugae 中，靈芝酸 B 及 C₂之含量也有明顯差別，由 0.1 mg/g 到 1.7 mg/g 均有，但整體平均仍遠高於 G. lucidum 及 G. tropicum 等台灣常見之種類。至於子實成熟度與 B 及C₂之關係，筆者亦曾初步分析，大致以擔孢子釋放前達到最高峰，但詳細之結果仍有待進一步研究。

具有保肝作用的靈芝酸 C₂，以及常與之共生的靈芝酸 B，
可作為靈芝採收時間和產品品管之指標

至於是否靈芝酸 C₂含量高的種類，就是緩和肝臟毒性效果最佳的種類，也不盡然。一般而言，如果單獨使用靈芝酸 C₂之效果相當不錯（約 50% 之緩和效果），但不含靈芝酸 C₂的靈芝種類也多少具有 20～25% 之緩和效果。顯示靈芝酸 C₂不是唯一具有緩和肝臟毒性的有效成分，也就是說，在眾多三萜類或類似成分中，仍有許多是值得進一步探索的。

不過國內的栽培種一般都採用 G. tsugae 及 G. lucidum，亦即都具有靈芝酸 B 及 C₂，因此筆者也建議將靈芝酸 B 及 C₂作為靈芝產品的指標，因為在大量萃取靈芝子實體過程中，如果靈芝酸 B 及 C₂能夠萃取出來，其他類似的成分也都會同時取得。因此，無論在子實體採收時間、原料購入、加工過程之管控及成品品管，均可以在一天內得到結果。

由64種靈芝種類中分析靈芝酸 B 及 C₂的結果顯示，在收集的 18 個生物種子實體中，9 種不含此二種三萜類成分，而含三萜類的 9 種生物種中，靈芝酸 B 的含量最高為 1.8 mg/g，分析到最小量為 0.01 mg/g，而靈芝酸 C₂最高為 1.3 mg/g，最少為 0.009 mg/g，相差百倍之多。其確定的分類及演化關係，則有待進一步確認。

參考文獻

1. 林宏偉，1986，肝炎生藥之研究，台北醫學院藥學研究所碩士論文。

2. 詹美華，1992，松杉靈芝三萜類純化對小白鼠急性肝障礙排除之影響。台北醫學院醫學研究所碩士論文。

3. Su CH, Lai MN, Chan MH. 1993. Hepato-protective triterpenoids from Ganoderma tsugae in Murrill. In: Mushroom Biology and Mushroom Products, Edited by Chang ST, Buswell JA, Chiu SW. The Chinese University Press, Hong Kong, pp. 275-283.

4. Kohda, et al. 1985. The biologically active constituents of Ganoderma lucidum histamine release-inhibitory triterpenes. Chem. Pharm. Bull. 33: 1367-1374.